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成果转化

前胸腺素基因重组质粒构建和表达产物定性定量

时间 :2023-07-19 11:07:49  来源 :  作者 :
    在人类疾病治疗中 ,本产品可用于系统性红斑狼疮 、乙型 、丙型肝炎 、非典型肺炎等病毒性疾病 、免疫缺陷病 、癌症 、男女不育 、艾滋病 、心血管和神经疾病的治疗 。该药物还可用于某些动物疾病的治疗 ,如鸡传染性贫血 、腺病毒病 、禽流感 、传染性法式囊病 、大肠杆菌病 、沙门氏菌病等 。
    目前 ,国内外主要采用动物组织 ,如从动物胸腺提取方法制备胸腺素 。此外 ,也有采用生物合成法生产胸腺素α1的报道 。市场所售的胸腺素成本高 、产量低 、价格昂贵 。本技术是利用基因工程法生产胸腺素的一种创新技术 ,即 ,将牛前胸腺素基因克隆到细菌的基因组中 ,通过重组工程菌的发酵液来生产前胸腺素α ,生产工艺主要涉及细菌发酵 ,蛋白提取纯化等 ,工艺路线简单 ,可以工业化生产 。生产成本大幅降低 。
    课题组先后开展了“牛前胸腺素-α(ProT-α)基因的克隆和鉴定” 、真核和原核基因重组工程菌等研究工作 ,取得了如下结果 : 
开展了犊牛前胸腺素-α(ProT-α)基因的克隆和鉴定等研究 ,获得了犊牛ProT-α的cDNA基因 ,该基因由1039bp组成 ,已提交GenBank数据库(注册号 :DQ333385);构建了犊牛ProT-α基因重组酵母菌株 ,摇瓶表达量达到30mg•L-1;构建了大肠杆菌重组工程菌 ,对表达产物进行了定性和定量鉴定 ,结果表明ProT-α重组蛋白分子量约为38KD ,摇瓶表达量约为161mg•L-1 ,纯化后产物纯度达到96%以上 。
    三 、对重组大肠杆菌发酵工艺进行了系统研究 ,ProT-α重组蛋白工程菌发酵条件经优化 ,50L发酵罐菌体干重达34g•L-1 ,重组蛋白表达量占菌体干重的26% ,初步达到工业化生产的技术要求 。
四 、基因表达产物活性测定表明 ,该融合蛋白可显著增加小鼠NK细胞和脾细胞的活性 ,与市售意大利人工合成产品(日达仙)比较 ,具有基本一致的生物活性水平 。
    五 、本项目已申请国家发明专利一项(专利申请号 :200410035736.9) ,发表研究论文4篇 。
    本项目于2006年12月通过山东省科技厅组织的成果鉴定 ,该研究成果达到了国际同类研究的先进水平 。
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